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UV1901紫外分光光度計(jì)測(cè)葡萄糖的方法
測(cè)定葡萄糖是臨床化學(xué)中的重要檢測(cè)項(xiàng)目，鉬類雜多酸是光度分析中的重要顯色劑，主要用來測(cè)定硅、磷等物質(zhì)。葡萄糖在適當(dāng)條件下能有顯色反應(yīng)，其吸光度與葡萄糖濃度呈線性關(guān)系.
實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
UV1901紫外分光光度計(jì)（上海奧析科學(xué)儀器有限公司）
UV1901紫外分光光度計(jì)采用濱松無臭氧環(huán)保型氘燈，普通長壽命氘燈會(huì)有臭氧產(chǎn)生，長期吸入對(duì)身體有害，無臭氧長壽命氘燈就可以有效避免。儀器還采用德國歐士朗鎢燈，美國派來芝檢測(cè)器，雙光束光學(xué)系統(tǒng)，加厚光學(xué)底板，更能保證儀器的穩(wěn)定性。操作界面和操作系統(tǒng)都是簡便快捷版的，減少了檢測(cè)時(shí)間的同時(shí)，增加準(zhǔn)確性.吸光度可以到小數(shù)點(diǎn)后四位。可選配多種附件，自動(dòng)四聯(lián)池，七聯(lián)池，恒溫裝置，透過率固體架，反射率固體架等。
UV1901紫外分光光度計(jì)的顯示方式：6英寸 320×240 點(diǎn)陣帶背光數(shù)字 LCD
光源燈：預(yù)調(diào)日本濱松無臭氧環(huán)保型氘燈 歐司朗長壽命鹵鎢燈
光學(xué)系統(tǒng)：精密雙光束光學(xué)系統(tǒng)
接口：RS232C串行通訊口用于接配軟件，并行打印口用于接配打印機(jī)
光譜掃描功能：主機(jī)及軟件支持
電源電壓：100V～240V 50/60±1Hz
儀器尺寸：650×450×220（mm）
凈重：25Kg
特點(diǎn)
UV1901紫外分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)和電路控制系統(tǒng)設(shè)計(jì)十分嚴(yán)謹(jǐn),元器件的選用控制嚴(yán)格,具有高標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確度、重復(fù)性、低噪聲和低雜散光指標(biāo)，線性范圍和穩(wěn)定性指標(biāo)也十分出色。有1nm和2nm帶寬兩種配置適合不同用戶選擇，大屏幕LCD顯示，具高測(cè)量精度和穩(wěn)定性，是一款高品質(zhì)的儀器。
UV1901紫外分光光度計(jì)使用日本濱松無臭氧環(huán)保型氘燈，使用壽命達(dá)到2000小時(shí)，光輸出可保持穩(wěn)定直至其使用壽命，替換極為方便。
UV1901紫外分光光度計(jì)提供2種操作模式：主機(jī)測(cè)量模式或軟件控制測(cè)量模式。
內(nèi)建的SCM技術(shù)和定性定量分析軟件能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)采集與處理、光譜測(cè)量、動(dòng)力學(xué)測(cè)量、定量分析、DNA測(cè)定和光譜掃描等擴(kuò)展功能。菜單下拉式分析軟件易于操作。
UV1901紫外分光光度計(jì)具有開放式的樣品室，可選配反射樣品架、固體樣品架、恒溫水浴和自動(dòng)進(jìn)樣器等適合于不同的應(yīng)用。
單機(jī)掃描曲線可以存儲(chǔ)9條，工作曲線可以存儲(chǔ)9條。聯(lián)機(jī)模式儲(chǔ)存數(shù)量不限。
主要技術(shù)指標(biāo)
型號(hào) | UV1901型 | UV1902型 | |
測(cè)光方式 | 透過率，吸光度，能量，反射率 | ||
光譜帶寬 | 1nm | 2nm | |
波長范圍 | 190nm～1100nm | ||
波長準(zhǔn)確度 | ≤±0.3nm | ||
波長重復(fù)性 | ≤0.1nm | ||
★光度范圍 | 0-999.9%(t),-4A～4A，0-9999C，1-9999F | ||
光度準(zhǔn)確度 | ≤±0.3%(t) (0～100%t) ≤±0.002A(0～0.) ≤±0.004A(0.5～1A) | ||
光度重復(fù)性 | ≤0.15%(t) (0-100%t) ≤0.001A(0～0.) ≤0.002A(0.5～1A) | ||
雜光 | ≤0.03%(t) （220nm NaI，360nm NaNO2）） | ||
★穩(wěn)定性 | ≤±0.0004A/h（500nm，開機(jī)預(yù)熱30min） | ||
噪聲 | ≤±0.0003A | ||
★基線平直度 | ≤±0.001A（190～1100nm） | ≤±0.0008A（190～1100nm） | |
★導(dǎo)數(shù)分辨率 | >0.5 | ||
掃描速度 | 快 中 慢 | ||
分析軟件
舒適的操作感受和豐富的分析功能--UVCON系列定性定量數(shù)據(jù)處理分析軟件
UVCON系列定性定量數(shù)據(jù)處理分析軟件是為上海奧析科學(xué)儀器有限公司的1700、1800和1900三個(gè)系列儀器的分析軟件。通過通訊電纜將儀器主機(jī)的RS232C通訊口與電腦上的串行通訊口或USB口聯(lián)接，利用軟件對(duì)主機(jī)的運(yùn)行進(jìn)行控制，并對(duì)主機(jī)采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、處理或輸出，幫助完成從常規(guī)質(zhì)控到環(huán)保、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)衛(wèi)生、材料等諸多領(lǐng)域的分析研究。
●光譜測(cè)量
峰谷檢測(cè) 掃描參數(shù)設(shè)定 掃描圖譜
●動(dòng)力學(xué)測(cè)量
動(dòng)力學(xué)測(cè)量可測(cè)定從1秒-10小時(shí)的透射比或吸光度的時(shí)間變化，記錄間隔從0.1-60秒，可以觀察快速的反應(yīng)和變化。在數(shù)據(jù)處理功能中有峰谷檢測(cè)和導(dǎo)數(shù)運(yùn)算。
磷鉬黃（鈉鹽）溶液：濃度為0.10mol/l（PH 1,4）鹽酸-鄰笨二甲酸氫鉀緩沖液：濃度為0.4mol/l（PH3.0），使用前將這兩種溶液1:1混合，制成即用的磷鉬黃混合顯色溶液；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.00mol/l。所用試劑均為二級(jí)以上，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。
測(cè)量方法
于一系列25ml容量瓶中，加入一定量的葡萄糖溶液，加4.0ml磷鉬黃混合顯色溶液，再加少量蒸餾水，將容量瓶放入沸水浴中加熱60min，取出流水冷卻，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。靜置片刻后，以試劑為空白，于波長690nm處測(cè)定其吸光值。
反應(yīng)溫度與時(shí)間
在室溫下，磷鉬黃與葡萄糖混合，即使放置1-2D，也未見發(fā)生反應(yīng)。
然而，當(dāng)置于沸水浴中時(shí)，反應(yīng)速度將大大提高，60。min后，顯色達(dá)
zui大。
圖1
a—葡萄糖4×10-5molL,加入混合顯色溶液4.0mL,25mL體積;b—葡萄
糖2×10-3molL,其它同a
2.1.2 反應(yīng)酸度的確定 實(shí)驗(yàn)表明,磷鉬黃與葡
萄糖在pH2～4之間反應(yīng)比較適宜,pH值太小,顯色不*,pH值過大,磷鉬黃將分解。
2.1.3
磷鉬黃用量選擇 實(shí)驗(yàn)了一系列不同濃度磷鉬黃的用量,對(duì)葡萄糖在2.0×10-3molL、0.1molL的磷鉬黃用量為1.8mL時(shí),吸光度已達(dá)zui大值。本實(shí)驗(yàn)選定為2.0mL。
2.1.4 緩沖液及其用量選擇 實(shí)驗(yàn)了乙酸2乙酸鈉,磷酸鹽,檸檬酸2NaOH和HCl2KHC8H4O4緩沖溶液。結(jié)果表明,用HCl2KHC8H4O4(pH3.0)緩沖
溶液時(shí),顯色比較快。而另外3種緩沖溶液顯色速度慢,所以選擇了HCl2KHC8H4O4緩沖溶液。其用量為2mL左右時(shí),顯色穩(wěn)定。
2.2 測(cè)量吸光度的*波長的選擇
通過對(duì)顯色溶液的波長
掃描實(shí)驗(yàn),波長在690nm附近吸收zui大,選定690nm處為吸光度測(cè)定波長。
2.3 共存物質(zhì)的影響及消除
對(duì)8×10-5molL的葡萄糖試液,50倍的SO42-,NO3-,Cl-,F-,醋酸根,檸檬酸根,酒石酸
根,EDTA不影響測(cè)定。而SO32-,S2-,NO22-及Fe2-等倍時(shí)就嚴(yán)重干擾測(cè)定。維生素C嚴(yán)重干擾,但維生素C在室溫時(shí),可與磷鉬黃*反應(yīng),對(duì)于維生素C含量不太高時(shí)(等量葡萄糖濃度或以下),能利用反應(yīng)速度的差異,差減扣除其干擾。
2.4 葡萄糖與磷鉬黃反應(yīng)的量的關(guān)系
采用等摩爾法測(cè)定了葡萄糖與磷鉬黃反應(yīng)量的比例關(guān)系,結(jié)果見圖2。從圖可見,當(dāng)摩爾比為1∶1時(shí),吸光度zui大。從文獻(xiàn)[4]報(bào)道的鉬藍(lán)顯色反應(yīng)機(jī)理看,本文研究的顯色反應(yīng),也可能為氧化還原過程。葡萄糖濃度+磷鉬黃濃度=1×10-3molL
2.5
工作曲線的制作
于一系列25mL的容量瓶中,分別加入1.00molL的葡萄糖0,2,5,10,20,30,50ΛL,再加磷鉬黃混合顯色溶液4.0mL,添加大約5mL二次蒸餾水,搖勻。沸水浴中加熱60min,取出流水冷卻,稀釋至刻度。1cm比色皿,690nm處測(cè)定吸光值A。得到回歸方程的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為:y(吸光
度)=218197x(molL)+0.0018,相關(guān)系數(shù)r=0.9988
2.6 葡萄糖注射液樣品的測(cè)定
A:葡萄糖注射液100mL瓶裝,含葡萄糖10g。
取5.0mL樣品,稀釋至50mL,搖勻,分析中每份取此溶液200ΛL。
B:葡萄糖氯化鈉注射液250mL瓶裝,含葡萄糖12.5g。取5.0mL樣品,稀釋至50mL,搖勻,分析中每份取此溶液500ΛL。按分析方法進(jìn)行操作,得到的結(jié)果見表1
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